Вы здесь

Постоянные микроскопические препараты. Фиксаторы. Часть 2

Средняя: 5 (1 оценка)
Постоянные микроскопические препараты

Фиксатор Карнуа

  • спирт абсолютный (100º) – 6 частей, 60 мл
  • ледяная уксусная кислота – 1 часть, 10 мл
  • хлороформ – 3 части, 30 мл

Протекает быстро, долго оставлять в фиксаторе не следует (≈ 1 час). Обычно используются 6 кубов 100º спирта и 2 куба ледяной уксусной кисоты.

Проводка через спирты (после Карнуа)

Слить фиксатор, залить материал 96º спиртом (3-4 смены) до исчезновения запаха уксусной кислоты. Выдержать в этих спиртах 2-3 часа или более. Этот спирт в дальнейшем можно использовать для приготовления фиксатора или промывки после него. Перевести в абсолютный спирт – 2 раза на 1,5-2 часа.

Дальнейшая обработка универсальна: Смесь I - 1,5 часа.

Смесь II - 1,5 часа.

Смесь III - 1,5 часа.

Хлороформ I - 2 часа

Хлороформ II - 2 часа (можно на ночь). Поставить в термостат (40ºС). Через 1-2 часа на 60ºС. Оставить на несколько дней до удаления запаха хлороформа и на вкус (сладость) (до 10 дней).

Разновидность фиксатора Карнуа (в полевых условиях):

  • спирт 96º – 6 мл
  • уксусная кислота 100% – 1 мл

Фиксатор Мактворы

  • спирт 70º – 90 мл – 18 мл – 9 мл
  • формалин – 5 мл –1 мл – 0,5 мл
  • уксусная кислота крепкая – 5 мл – 1 мл – 0,5 мл

Фиксатор спиртово-уксусный

  • спирт 3 части
  • уксусная кислота 1 часть

После фиксации, материал обрабатывается в течении 24 часов 3%-ным водным раствором Сr2O3 для легкго нарезания срезов на микротоме.

Фиксатор FAA

  • спирт 70º – 100 мл
  • 40% формалин (тот, что в продаже) – 7 мл
  • ледяная уксусная кислота – 7 мл.

В этом фиксаторе материал выдерживается 3 суток, затем переводят в 70º спирт (≈ на 2 часа). В следующем 70º спирте материал хранится постоянно.

Фиксатор Серра (класический)

  • спирт 96º – 3 части
  • 40% формалин – 1 часть

Фиксатор Серра (по Никифорову)

  • спирт 96º – 7 частей
  • 40% формалин – 3 части
  • уксусная кислота – 0,1 части

Фиксатор спирт-формалин

  • спирт 70º – 100 мл, 40% формалин – 2 мл.
  • 10 мл формалина на 100 мл спирта 70º.
  • 4-10 мл 40% формалина на 100 мл 50º спирта.

Биоматериал в этом фиксаторе можно долго держать.

Фиксатор Левицкого (модификация Навашина)

І смесь: (до 3-х дней)

  •  CrO3 1% – 3 мл
  • формалин 10% – мл  (17мл/20 мл)

ІІ смесь: (до 7-ми дней)

  • CrO3 1% – 15 мл
  • Осмий 2% – 2 мл
  • Вода дистиллированная – (18мл/35 мл)

Промывать сутки в проточной воде. После обезвоживания спиртами перед парафином проводить через ксилол.

Фиксатор ФУС (спирт-формалин-уксусная кислота)

  • Ледяная уксусная кислота – 5 мл
  • 40% формалин, тот что в продаже – 5 мл
  • Спирт 50-70º – 90 мл

Фиксатор Бенсли

  • 2% Осмиевая кислота – 2 мл
  • 10% Двухромовокислая кислота – 2 мл
  • Вода дистиллированная – 6 мл
  • Уксусная кислота – 1 капля

Держать 24 часа, промыть как обычно. До окраски требуется окраска перекисью водорода.

Фиксатор Левитского

Из всех фиксирующих веществ (включая и жидкость) наилучшие результаты получены:

Смесь І: (2-3 дня)

  • 10% формалин – 9 частей
  • 1% хромовая кислота – 1 часть

Смесь ІІ: (7 дней)

  • 1% хромовая кислота – 15 частей
  • 2% осмиевая кислота – 4 части

Дальнейшая обработка и окраска железным гематоксилином обычная. Толщина срезов 2 µ.

Фиксатор Ньюкамера

  • 6 частей – пропилового спирта
  • 3 части – пропионовой кислоты
  • 1 часть – ацетона
  • 1 часть петролейного эфира
  • 1 часть диокана

Фиксатор для морфологических целей. Хранить 1 сутки, заменить новой порцией и можно оставить в фиксаторе на любой срок.

Фиксатор Craf III

  • 0,3% хромовая кислота
  • 2% уксусная кислота
  • 10% формалин

Обработка материала – предфиксационным раствором 8-гидрооксихинолина (0,002 мол. водного раствора)

Приготовление: 0,058 гидрооксихинолина растворяется в 200 мл тёплой дистиллированной воды.

  • Обработка производится при температуре проточной воды (10-15ºС) в течение 3-4 часов.
  • Промывка в воде в течение 5 минут.
  • Фиксация по Карнуа в течение 24 часов.
  • Промывка и проводка для постоянных препаратов. Промывка 96º спиртом.
  • Окраска: после фиксации промывка, затем окраска в ацетоорсеине (9 частей 2% орсеина + 1 часть 1N НСІ) в течение нескольких минут со слабым подогревом. Затем объект переносится на предметное стекло в каплю 1% ацетоорсеина и раздавливается (если материал хранится в 70º спирте, то перед окраской он помещается на 1 час в 45% уксусную кислоту).

Приготовление ацетоорсеина: 2 г. орсеина на 100 см3 ледяной кислоты. Слегка прокипятить, остудить и профильтровать. Для получения 1% ацетоорсеина добавить равное количество дистиллированной воды.

Начало статьи читайте: Постоянные микроскопические препараты. Фиксаторы. Часть 1

Авторы статьи: Ляпустина Е.В., Сатарова Т.Н.

Автор фото (микротомный срез фиксированной зерновки кукурузы - постоянный препарат ) в статье: Ляпустина Е.В.

Добавить комментарий