Для получения липидообразующих дрожжей использовалося глубинный метод культивирования. Для выращивания дрожжей использовали такие питательные среды:
- Среда Сабуро: глюкоза (40 г), пептон (10 г), агар-агар (18 г), вода дистиллированная (1000 мл) рН 5,5. Компоненты поочередно смешивали, затем после добавления дистиллированной воды нагревали до исчезновения осадка и разливали по подготовленным лабораторной посудой. Стерилизовали при 0,8 атмосфер в течение 30 мин.
- Пивное сусло, разбавленное с содержанием сахара до 60оБ, не хмельное; рН 5,2. Брали концентрированное среду и разводили его в два раза и стерилизовали при 0,8 атм. течение 30 мин.
Условия культивирования дрожжей в биореакторе были оптимальными для их роста: температура 28-30оС, рН 5,0 -5,8 в зависимости от среды.
Высушенную биомассу дрожжей оживляли в колбе на 250 мл в стерильной среде МПБ + МПА + глюкоза с общим объемом жидкости 100 мл. Среда проверили на бактериальное заражение, выдержав 3-4 дня при комнатной температуре без засева. В дальнейшем лучше хранить в холодильнике, поскольку там среда меньше испаряется.
В среду перед посевом дрожжей добавляли антибиотик пенициллин для предотвращения роста нежелательной прокариотической микрофлоры. Далее культивирования дрожжей осуществляли в колбах объемом 500 мл качалке (220 об / мин) в течение 6 суток на жидких питательных средах выше указанного состава.
Как посевной материал использовали трехсуточные культуры Candida tropicalis, Lipomyces lipofer, выращенные на среде МПА + МПБ + Глюкоза (40%). Количество посевного материала составляла 5% от объема суспензии дрожжей доказанных с оптической плотностью до 1 (109 клеток / мл).
Концентрацию биомассы микроорганизмов в начале и конце культивирования определяли весовым методом. Для этого в ходе работы мы сначала взвешивали доведенный до постоянной массы бумажный фильтр. Затем через бумажный взвешенный фильтр проводили фильтрацию культуральной жидкости. Пробу помещали в бюкс, высушивали и доводили до постоянной массы в сушильном шкафу при температуре 103±2°С.
Массу сухого вещества определяли по формуле (в г / л):
х = (А-В)*5/V,
где А — масса фильтровальной бумаги с сухой биомассой, г; В — масса сухой фильтровальной бумаги, г; V — рабочий объем — 0,2 л.
Автор статьи: Дохторук Андрей, ст. каф. Микробиология и вирусология, Днепропетровского национального университета им. Олеся Гончара