Постоянные микроскопические препараты. Фиксаторы. Часть 1

Опубликовано: 03 апреля 2017 | Статьи по биотехнологии

Изготовление постоянных микроскопических препаратов (ПМП) для целей цитологии и эмбриологии, включая обработку (подготовку) материала, состоит из следующих основных операций:

  1. Фиксация – быстрое умерщвление ткани с целью сохранения неизменными прижизненных структур.
  2. Проводка – промывка, обезвоживание и заключение в среду подходящую для нарезки на микротоме.
  3. Приготовление срезов, наклеивание их на предметные стекла.
  4. Окрашивание срезов.
  5. Заключение срезов в среду, которая обеспечивает длительное хранение препаратов.

Приведем некоторые примеры наиболее распространённых фиксаторов в эмбриологии и цитологии растений, а также методики фиксации.

Фиксатор Навашина

  • хромовая кислота (СrO3) – 10 мл
  • 16% формалин от 40%-ного формалина (тот, что в продаже) – 4 мл (40 мл 40% формалина + 60 мл воды дистиллированной)
  • уксусная кислота (СH3COOH!) концентрированная – 1 мл

Хромовую кислоту можно, при необходимости, заранее соединить с уксусной. Формалин нужно добавлять непосредственно перед фиксацией. Фиксатор не должен быть теплым. В поле следует защищать его от солнечных лучей. Можно обернуть бутылки мокрой тряпкой. Фиксатор проникает медленно. Срок фиксации 16–20-48 часов. Перед фиксацией по Навашину следует окунуть материал в 70º спирт или Карнуа, для вытеснения воздуха. При необходимости измельчение материала (объекта) для фиксации проводится под поверхностью фиксатора.

После фиксации требуется тщательная промывка водопроводной водой (3-4 смены).

Проводка через спирты (после фиксатора Навашина):

Понедельник (1-ый день) Вторник (2-ой день) Дальнейшая обработка
10º→30 минут 70º→2-3 часа и больше (до нескольких дней) Смесь I – 1,5 часа. Смесь II – 1,5 часа. Смесь III – 1,5 часа. Хлороформ I – 2 часа Хлороформ II – 2 часа (можно на ночь). Поставить в термостат (40ºС). Через 1-2 часа на 60ºС. Оставить на несколько дней до удаления запаха хлороформа и на вкус (сладость) (до 10 дней).
20º→30 минут 80º→1-2 часа
30º→30 минут 90º→1-2 часа
40º→40 минут 95º→1-3 часа
50º→60 минут 100º→1-3 часа (І)
60º→1 час 30 минут 100º→1-3 часа(ІІ)

Далее следует закапывание материала в блоки, нарезка, наклейка и окраска препаратов.

Продолжение статьи читайте: Постоянные микроскопические препараты. Фиксаторы. Часть 2

Авторы статьи: Ляпустина Е.В., Сатарова Т.Н.

Автор фото в статье: Ляпустина Е.В.

 

Метки: