Производство вакцины от пастереллеза. Стадия 3 Получение посевного материала

Технологическая стадия изготовления получения посевного материала (ТП-3) во время производства вакцины от пастереллеза состоит из следующих операций:

ТП-1. Изготовление МПБ – мясопептонный бульон

Для хранения посевного материала используют полужидкий мясопептонный бульон, приготовленный на мясном воде: на одну часть фарша из говяжьего или конского мяса от животных средней упитанности берут две части (1:2) дистиллированной обессоленной питьевой воды. Смесь настаивают два часа при частом перемешивании. Затем смесь медленно подогревают, доводят до кипения и 30 минут кипятят, при этом к смеси добавляют 0,3% натрия хлорида. После кипения фарш отжимают, мясную воду фильтруют через ватный фильтр и выливают в варочную емкость, добавляя воду до первоначального объема и 10% на выпаривание. Добавляют 1% пептона, доводят до кипения, добавляют 0,15% агара, предварительно растопленного в том же мясном настое, при помешивании добавляют 0,5% натрия фосфорнокислого двузамещенного. Кипение прекращают и доводят рН до 7,6-7,8 добавлением 10% раствора гидроокиси натрия или насыщенного раствора двууглекислого и снова кипятят 20 минут, после чего отстаивают 30-40 минут и фильтруют через нутч-фильтр. Разливают в посуду (флаконы) соответствующей емкости, стерилизуют в автоклаве при температуре 110-115°С в течение минуты. Полужидкий мясопептонный бульон должен быть прозрачным или с незначительной опалесценцией, желтоватого цвета, без осадка, иметь рН 7,4-7,6.

ТП-2. Получение посевного материала

Для приготовления маточной культуры каждый производственный штамм пастерелл с пипеток засевают в отдельные маточные флаконы или колбы емкостью 0,2-0,5 л с питательной средой. Потом, эту питательную среду засевают производственными штаммами. Посевы выращивают в термостате при температуре 35-36°С в течение 18-24 часов, после чего бульонную культуру каждого штамма микроскопируют. В мазках должны быть короткие палочки без других инволюционных форм. Контрольные висел на МПА и МПБ должны быть чистыми. После макро- и микроскопии бульонную культуру производственных штаммов с флаконов или колб пересевают в маточные бутыли с питательной средой. Одновременно проводят контрольные посевы в пробирки МПА и флаконы с МПБ или бульоном Хоттингера. Засеянные бутыли тщательно встряхивают и ставят в термостат на 18-24 часа при температуре 35-36°С. Через 18-24 часа маточную культуру в бутылях и контрольные посевы контролируют методами макро- и микроскопии и бактериологически на чистоту роста культуры. При отсутствии посторонней микрофлоры и инволюционных форм маточную культуру используют для засева питательной среды в ферментере.