Производство вакцины от пастереллеза. Стадия 4 Культивирование пастерелл

Технологическая стадия культивирования пастерелл (ТП-4) во время производства вакцины от пастереллеза состоит из следующих операций:

ТП-1. Стерилизация питательной среды

Питательную среду получают из реакторов Р-5 и Р-6. В заранее подготовленный стерильный реактор Т-1 1000 л заполняют не более чем на 1/2 его вместимости, соответственно 599,76 кг питательной среды для вакцины. Перед стерилизацией к питательной среде добавляют 14,84 кг пеногасителя (абрикосовой, персиковой, подсолнечного рафинированного или кукурузного масла) для понижения пенообразования при выращивании пастереллезной культуры. Стерилизуют питательную среду в реакторе при температуре 116-118°С в течение 50-60 минут. После стерилизации питательной среды охлаждают до температуры 37-38°С, пропуская за внешнюю оболочку реактора охлажденную воду, периодически перемешивая питательную среду механической мешалкой. При охлаждении в реакторе поддерживают избыточное давление на уровне 0,5-0,6 атм., добавляя по мере необходимости, стерильный сжатый воздух. После охлаждения питательную среду проверяют на стерильность путем высева на МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом и агар Сабуро. Одновременно берут образцы для определения рН и микроскопии. Готовая питательная среда должно быть стерильной, без осадка, прозрачной или слегка опалесцирующей, светло-коричневого цвета, рН 7,8-8,0, с содержанием аминного азота – 175-200 мг%.

ТП-2. Засев пастерелл

Чистый посевной материал каждого штамма пастерелл, с соблюдением условий стерильности, через посевную трубку засевают в ферментер с питательной средой. Количество посевного материала равен 60,86 кг объема, содержание реактора перемешивают механической мешалкой 5-10 минут и оставляют на стадии покоя два часа.

Выращивание в реакторе ведут при температуре 36-37°С, без перемешивания в первые два часа после посева. Через два часа и до конца выращивания, перемешивание ведется непрерывно с одновременной подачей стерильного воздуха для аэрации. Количество стерильного воздуха для аэрации должна быть в пределах 1,5-2 объемов в 1 минуту до объема культуры в реакторе. Период выращивания пастереллезной культуры в реакторе 16-18 часов с момента посева.

ТП-3. Питание глюкозой

Для интенсификации культивирования растущей культуры добавляют 0,54 кг глюкозы в виде 40% стерильного раствора. Раствор глюкозы добавляют мелкими порциями, 3-4 раза за период выращивания, при этом первую порцию добавляют через 2 часа после посева, то есть с началом постоянного перемешивания. Концентрацию водородных ионов (рН) во время выращивания регулируют ощелачивания до рН 7,6-7,8 добавлением 4% раствора гидроокиси натрия в количестве 0,19 кг.