Эффективность биоспорина в качестве корректирующего средства при экспериментальном дисбиозе урогенитального тракта мышей
Лечение инфекционных болезней и осложнений практически невозможно без антибиотических препаратов. Однако длительное применение антибиотиков может привести к возникновению и развитию дисбиотических состояний, характеризующихся значительными нарушениями в составе микробиоценоза и требующих обязательной последующей корригирующей терапии с применением пробиотических препаратов. Изготовление пробиотика на этапе внедрения препарата требует проведения доклинических исследований характера действия препарата на экспериментальных животных.
При коррекции дисбиотических состояний УГТ преимущественно используют препараты на основе лактобацилл. Целью же наших исследований было изучение возможности использования препаратов на основе споровых бацилл. Выбор нами этой группы препаратов для исследований на животных был обусловлен тем, что бациллы входят в состав нормальной флоры УГТ животных. В экспериментах нами было изучено влияние интравагинального введения препарата «биоспорин» на состояние микробиоценоза УГТ при воспроизведении искусственного дисбиотического процесса.
Введение препарата осуществляли в течение 5 дней в виде суспензии (50 мкл), полученной разведением содержимого ампулы пробиотического препарата (полученная суспензия содержала 1 × 109 клеток / мл). Изменения в микробиоценозе отслеживали в течение 30 дней на 2-е, 7-е, 10-е, 15-е и 30-е сутки после введения возбудителя. Оценивали изменения в качественном и количественном составе микрофлоры, восстановление микробиоценоза до показателей нормы, исчезновения микроорганизмов — компонентам препарата или наоборот колонизации ими УГТ животных.
Мышей были разделены на 2 группы:
- Группа 1 (контроль) — группа животных, которым осуществляли введение пробиотика, без предварительной нагрузки стафилококком, n = 8;
- Группа 2 (опыт) — животные, которым вводили пробиотик после развития у животных экспериментального дисбиоза, n = 14.
Препарат (опытной группе) и физиологический раствор (контрольной группе) вводили интравагинально в течение 5 суток.
Отмечено, что есть значительная разница между составом микрофлоры УГТ животных до и после применения препарата. До лечения животные имели частоты встречаемости и титры микроорганизмов, отвечающие зафиксированным при создании модели экспериментального дисбиоза при нагрузке золотистым стафилококком, который нами был создан на базе кафедры микробиологии и вирусологии Днепропетровского национального университета.
Так, частоты встречаемости микроорганизмов в опытной группе к применению препарата по сравнению с контролем были выше для Enterococcus spp. (определен в 50% животных), Micrococcus spp. (определен в 35,7% животных), Bacillus spp. (определен в 21,4% животных), представителей семейства Enterobacteriaceae sp. (в 3,72 раза), Gardnerella spp. (определен в 64,3% животных), Peptococcus spp. (в 1,14 раза), Peptostreptococcus spp. (в 1,29 раза), анаэробных Lactobacillus spp. (в 1,75 раза), Fusobacterium spp. (в 1,33 раза).
Титры сравнения с нормой растут в таких бактерий: Staphylococcus spp. (В 8,32 раза), Streptococcus spp. (в 1,35 раза), Enterococcus spp. (количество к лечению составляет 66 КОЕ / мл), Micrococcus spp. (количество до лечения составляет 60 КОЕ / мл), Bacillus spp. (количество к лечению составляет 66 КОЕ / мл), представителей семейства Enterobacteriaceae sp. (в 3,02 раза), Gardnerella spp. (количество к лечению составляет 69 КОЕ / мл), Peptostreptococcus spp. (в 1,70 раза), а снижение титров зафиксировано для микроаэрофильных (в 1,17 раза) и анаэробных (в 1,38 раза) Lactobacillus spp., Fusobacterium spp. (в 1,26 раза), Bacteroides spp. (в 1,23 раза).
После введения пробиотического препарата было отмечено значительный эффект. Так, по сравнению с животными к лечению вообще не определяются представители родов Enterococcus spp. и Micrococcus spp. Снижается частота выделения представителей семейства Enterobacteriaceae sp. (в 1,55 раза), Gardnerella spp. (в 6,43 раза), Peptococcus spp. (в 1,43 раза), Peptostreptococcus spp. (в 1,29 раза), Fusobacterium spp. (в 1,67 раза), зато растут частоты встречаемости микроаэрофильных (в 1,14 раза) и анаэробных (в 1,86 раза) Lactobacillus spp.
Увеличенной является частота встречаемости и титр микроорганизмов рода Bacillus spp. Учитывая то, что они являются составными пробиотического препарата, можно считать нормой. Одновременно это создает необходимость исследования в пролонгированном эксперименте, ведь бациллы не являются нормальной составляющей микробиоценоза УГТ.
На 30-й день провели контрольный высев животных экспериментальной группы с целью определения наличия и титра представителей рода Bacillus spp. Определено, что они выявляются у 100% животных, не сопоставляется с нормой (12,5%), определенной в контрольной группе. Количество их составляет 81 КОЕ / мл.
В сравнении с контролем после лечения установленной нормы возвращаются показатели частот встречаемости и титры микроаэрофильных и анаэробных Lactobacillus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Micrococcus spp., Gardnerella spp., Peptostreptococcus spp. Повышенными остаются частота встречаемости и концентрация Staphylococcus spp. (определены у 100% животных, титр выше в 1,95 раза). Это же справедливо для представителей семейства Enterobacteriaceae sp. Частота встречаемости их в 2,40 раза больше нормы, а вот титр выше в 1,05 раза, что не представляет статистически достоверной разницы. Меньше становится и содержание Peptococcus spp. (частота снижается в 1,25 раза, а титр в 1,58 раза), Fusobacterium spp. (частота снижается в 1,25 раза, а титр в 2,14 раза), Bacteroides spp. (частота возрастает в 1,25 раза, а титр уменьшается в 1,38 раза).
Из полученных данных очевидно, что биоспорин оказывает значительное воздействие при интравагинальном введении. Он способен осуществлять корректировку состояния микробиоценоза УГТ опытных животных в условиях воспроизведения на них модели экспериментального дисбиоза, созданной путем экзогенной микробной нагрузки золотистым стафилококком.
Источник: Ефективність біоспорину в якості коригуючого засобу при експериментальному дисбіозі урогенітального тракту мишей / Воронкова О.С., Сірокваша О.А., Полішко Т.М., Вінніков А.І. // Біотехнологія. Наука. Освіта. Практика: тези доповідей IV Міжнародної науково-практичної конференції (Дніпропетровськ, 11 – 13 листопада 2008 р.) – Дніпропетровськ, 2008. – С. 15-16.