Известно, что многие мицелиальные микроорганизмы продуцируют фермент липазу-триглицеролгидролазу (КФ 3.1.1.3). Фермент играет важную роль в клеточном метаболизме. Внеклеточная липаза, выделяясь во внешнюю среду, гидролизует триглицериды вне клетки. Внутриклеточная липаза преобразует собственные липиды клетки. Липаза является индуцибильным ферментом, и синтез ее активизируется добавлением в питательную среду жировых компонентов. Продуцент бета-каротина, мукоровый гриб Blakeslea trispora, культивируется на питательных средах, содержащих определенное количество растительного масла. В посевные среды вносят около 2%, а в ферментационные – 4% масла. Вероятно, Blakeslea trispora, подобно другиммикроорганизмам, гидролизует и усваивает субстратные жиры, также с помощью липолитических ферментов.
Материалом данного исследования служили штаммы смешанной культуры гетероталлического гриба Blakeslea trispora: (–) 490 и (+) 64 (совместимые половые формы). На стадии получения посевного материала штаммы выращивали раздельно на сусло-агаре в пробирках. Затем проводили раздельное глубинное культивирование в маточных колбах. Маточные среды содержали соевую и кукурузную муку, минеральные источники калия и витамин В1. Посевную культуру выращивали на среде аналогичной маточной, но с добавлением подсолнечного масла. Ферментацию проводили на среде, содержащей кукурузный экстракт, зеленую патоку, 4% растительного масла, рН среды 6,5. В ферментационную среду вносили β-ионон и сантохин в качестве стимулятора каротиногенеза и антиоксиданта соответственно.
В работе изучена динамика изменения липазной активности Blakeslea trispora в посевной и ферментационной культуре. В посевной культуре увеличение липазной активности совпадают с ростовыми качествами биомассы гриба. Максимальная активность липазы составляет 10 целевых единиц на 40-вом часу роста посевной культуры. В ходе ферментации изменение внеклеточной липазной активности имеет более сложный характер. Максимальных значений активность фермента достигает дважды: к 35-ому и 90-ому часам культивирования гриба и, в среднем, составляет 3,6 целевых единиц. Таким образом, утилизация субстратного масла у Blakeslea trispora осуществляется с помощью фермента липазы. При определенных технологических доработках внеклеточную липазу возможно выделять из культуральной жидкости продуцента как второй целевой продукт, что значительно удешевит получение β-каротина.
Источник:Изучение липазной активности продуцента бета-каротина Blakeslea trispora/ Безуглая Д. А., Зубарева И. М., Ляпустина Е. В., Митина Н. Б. // Хімія та сучасні технології: тези доповідей V міжнародної науково-технічної конференції студентів, аспірантів та молодих вчених (Дніпропетровськ, 20-22 квітня 2011р.) — Дніпропетровськ, 2011. — С. 461.