Лаборатория микроразмножения: требования к помещениям, их количеству и расположению
Работы по культивированию изолированных тканей растений и семян проводятся в асептических условиях в специально оборудованной для этого лаборатории. Лучше всего, если весь комплекс лабораторных помещений будет размещен в отдельном здании или все его комнаты сконцентрированы в одном месте с отдельным входом. В помещениях лаборатории должен соблюдаться режим стерильности и ограничиваться доступ лиц, не имеющих непосредственного отношения к данному процессу.
Лаборатория микроразмножения включает группу территориально взаимосвязанных помещений – моечную, весовую, автоклавную, ламинарную, световую, стерильный бокс, культуральную, помещение для персонала, кладовую и др. (рисунок). Для удобства в работе моечную, весовую и автоклавную необходимо соединить в единый комплекс; то же относится к ламинарной и световой комнатам. Кладовая и помещение для персонала должны находиться отдельно. Во всех помещениях полы следует выложить кафелем или устлать линолеумом, стены покрыть водоэмульсионной или масляной краской. В конце рабочей недели в комплексе лабораторных помещений обязательно проводится тщательная уборка с дезинфицирующими средствами. Помещения для ламинаров и стерильный бокс стерилизуются бактерицидными лампами (6-8 ч).
Рисунок — План-схема расположения помещений лаборатории микроразмножения НБС НАН Украины (Лаборатория биотехнологии растений)
I – культуральная; 2 – темновой отсек культуральной; 3 – ламинарная; 4 – кладовая; э – стерильный бокс; 6– коридор; 7 – лабораторное помещение; 8 – моечная; 9 – весовая; 10 – автоклавная; 11 – помещение для персонала
В моечной проводят основные подготовительные работы: мытье и первичную сушку посуды, обработку растительного материала перед введением в культуру. Эту комнату оборудуют моечными машинами, глубокими раковинами из кислотоустойчивого материала, трубопроводами холодного и горячего водоснабжения. В этом же помещении можно установить аппарат для дистиллирования воды. Для удобства в работе дистиллятор располагают на специальной подставке, прикрепленной к стене выше крана с водой. Под аппаратом устанавливают емкость для сбора дистиллированой воды.
Питательные среды лучше готовить в отдельной комнате, оснащенной аналитическими и торзионными весами, рН-метром, холодильником для хранения реактивов и маточных растворов, шкафами для хранения чистой посуды и емкостей с приготовленной средой. В весовой также должен быть расположен стол с большой (2,5-3,0 м2) влагостойкой столешницей для приготовления сред.
Согласно требованиям техники безопасности, автоклавную комнату лучше изолировать от всех остальных помещений. Пол в автоклавной должен быть кафельным с уклоном для стока воды в канализацию, стены обработаны водостойким покрытием. В помещении для стерилизации устанавливают автоклавы типа ГК-100 и сушильные шкафы.
Для проведения работ в септических условиях (высев семян, стерилизация и вычленение эксплантов с последующим субкультивированием на питательной среде) используют комнату с ламинарными боксами или стерильный бокс. В этих комнатах на потолках и над рабочими поверхностями необходимо разместить бактерицидные аргонно-ртутные (БУВ-15, -30) или ртутнокварцевые (ПРК-7) лампы. Стерильные материалы (салфетки, вату, химические стаканы, чашки Петри, воду и др.) удобно хранить тут же, в ламинарной комнате в непосредственной близости от ламинарных боксов и использовать по мере необходимости. Возле каждого бокса должен стоять автономный передвижной столик с легко моющейся поверхностью, который используют для проведения масштабных работ или для работ по введению эксплантов в стерильную культуру.
В стерильном боксе должен постоянно находиться бинокулярный микроскоп марки МБС-9; с его помощью удобно вычленять апикальные и пазушные меристемы исследуемых объектов. Здесь устанавливают столы, покрытые легко моющимся материалом, на которых размещают микроскопы и необходимый для работы инструмент. Комната должна быть хорошо освещена; перед работой ее в течение 2-3 ч стерилизуют бактерицидными лампами.
Для культивирования изолированных тканей, сеянцев, растений-регенерантов и проращивания семян используют помещение, оборудованное стеллажами для размещения емкостей с растениями и искусственным освещением. Подсветку можно осуществлять люминесцентными лампами ЛБ-40, -20, ЛД-40, -20 или их современными энергосберегающими аналогами со спектром свечения, близким к естественному. В световой необходимо поддерживать постоянную температуру (22-26°С) с суточными колебаниями около 2-4°С. С этой целью помещение нужно оборудовать кондиционером. Управление освещением лучше вести из отдельного помещения – аппаратной. Влажность в культуральном помещении должна составлять 70%, фотопериод – 8-12 ч. Лампы дневного света можно размещать как вертикально, так и горизонтально – в зависимости от сортимента культивируемых растений. Для дифференциации и культивирования каллусных тканей используют темновой отсек. В этом помещении устанавливают термостаты и стеллажи для культивирования каллусов; освещение должно быть автономным и включаться только в случае проведения контроля.
Источник: Черевченко Т.М., Лаврентьева А.Н., Иванников Р.В. Биотехнология тропических и субтропических растений in vitro. – К.: Наук. думка, 2008. – 559 с.