Разработка методов конструирования иммуномагнитных сорбентов
На сегодняшний день можно с уверенностью сказать, что будущее медицины и биотехнологии тесно связано с использованием наноматериалов и методов нанотехнологии. Именно нанотехнологии позволяют создавать магнитные сорбенты, которые дают возможность широкого спектра манипуляций с полученным объектом в магнитном поле. Функционализация поверхности заданным химическим группам и присоединения к ним специфических поли- или моноклональных антител (АТ) обеспечивает селективное связывание их с антигенными детерминантами.
Целью данного исследования было разработать оптимальные методы иммобилизации иммуноглобулинов (Ig) на поверхности магнитных сорбентов. Было использовано два метода иммобилизации моноклональных антител — простая сорбция и с помощью ковалентного связывания химическим реагентом. В качестве магнитных сорбентов использовались микрочастицы магнетита (Fe3O4), функционализированных алкоксисиланом, содержащий аминогруппы, что специфические до карбоксильной группы Fc-фрагменту Ig.
При физической сорбции Ig людины инкубировались в течение 3 часов с сорбентом, который имеет удельную поверхность 37 м2 / ч при комнатной температуре и постоянном перемешивании. Магнитные сорбенты осаждали с помощью внешнего Sm-Coмагниту. Через каждые полчаса раствор Ig отбирался и количество остаточных моноклональных антител определялась колориметрическим микрометодом Лоури. Проследив динамику сорбции оказалось, что эффективность сорбции составила 76%.
В методе ковалентного связывания, в качестве сшивающего агента между моноклональными антителами и магнитной частицей, использовали глутаровый альдегид. Аналогично первому методу Ig инкубировали с сорбентом при добавлении 2,5% глутаральдегид на 0,1 М фосфатном буфере (рН = 7,4). После анализа результатов оказалось, что эффективность сорбции составила 87%.
Кроме метода Лоури для анализа сорбции также использовали метод иммуноэлектроосмофореза. В основе данного метода лежит образование преципитацийнных дуг между остаточными Ig человека и моноклональными антителами.
Таким образом, исследовав приведенные методы иммобилизации Ig на поверхности магнитных частиц, можно сделать вывод, что эффективность ковалентного связывания на 10% больше, чем при пассивном адсорбции и метод может быть использован в дальнейшей работе.
Работа выполнялась в лабораторных условиях института гематологии и трансфузиологии АМНУ. Функционализированные магнито частицы были синтезированы учеными ИХП НАНУ и переданы для исследования.
Источник: Розробка методів конструювання імуномагнітних сорбентів / Л.Ю. Вергун, І.В. Мельник, А.О. Лямзенкова // Біотехнологія. Наука. Освіта. Практика: тези доповідей IV Міжнародної науково-практичної конференції (Дніпропетровськ, 11 – 13 листопада 2008 р.) – Дніпропетровськ, 2008. – С. 13