Как известно, успех введения в культуру in vitro во многом зависит от сроков выполнения работы. Чаще всего введение в культуру осуществляют в период активнй вегетации интактных растений. В наших опытах введение в культуруin vitro проводили в период с апреля (начало активного роста надземной части) по сентябрь месяц.
Введение в культуру in vitro вегетативных органов с сентября по ноябрь чаще всего демонстрировало высокую инфицированность исходных эксплантов различными патогенами. Применением указанных выше способов стерилизации не удавалось избавиться от инфекции. На 5-10-е сутки после введения в культуру у 60-80 % введенных эксплантов проявлялась скрытая грибная инфекция.
В результате изучения зависимости частоты каллусообразования эксплантов C. vitalba от сроков введения в культуру in vitro были получены данные, представленные на рисунке 3.1. В процессе исследований установлено, что частота каллусообразования различных типов эксплантов (апикальных частей вегетативных побегов, высечек молодых и физиологически зрелых листьев) зависела от сроков ведения в культуруin vitro и трофических факторов культивирования.
Рисунок 1 — Зависимость частоты каллусообразования различных эксплантов Clematis vitalba от сроков введения в культуруin vitro: а – при культивировании на среде В5; б – при культивировании на среде LS
Максимальная частота каллусообразования (на уровне 70-95 %) для всех исследованных типов эксплантов отмечена как на среде В5, так и на среде LSпри введении в культуру in vitro в мае-июне. При этом вегетативные почки и молодые листья активнее формировали каллус при культивировании на питательной среде В5. Как видно из данных, приведенных на рисунке 3.1, среда по прописи LS способствовала повышению частоты каллусообразования при культивировании высечек физиологически зрелых листьев.
При введении эксплантов в условияin vitro в мае и июле наблюдали сходные показатели частоты каллусообразования. При введении в культуру в августе – частота каллусообразования снижалась до уровня 40-50 % (ниже, чем в весенние месяцы). Нами отмечено, что при введении в культуруin vitro в весенние и летние месяцы уровень контаминации был выше у эксплантов апексов побегов, и ниже – у высечек листьев.
Начиная с первой декады сентября, введение эксплантов в культуруin vitro не было успешным из-за активного проявления экзогенной и эндогенной инфекции на растительном материале и его контаминации, составлявшей около 70 %.
Таким образом, по результатам исследований в условияin vitro растительный материал Clematis vitalba рекомендуется вводить в период с апреля по июль месяц. Высокая частота каллусообразования отмечена для эксплантов апикальных верхушек побегов. Однако, вследствие того, что уровень контаминации данного типа эксплантов был достаточно высоким для введения в культуру in vitro рекомендуется отбирать физиологически молодые листья.
Ссылки на литературу в тексте соответствуют источнику Индуцированный морфогенез in vitro и накопление тритерпеновых гликозидов в каллусных культурах ломоноса виноградолистного (Clematis vitalba L.)
Источник: Сидякин А.И., Индуцированный морфогенез in vitro и накопление тритерпеновых гликозидов в каллусных культурах ломоноса виноградолистного (Clematis vitalba L.): Дис. … канд. биол. наук. Симферополь. 2011. – 217 с.
Материал любезно предоставил Сидякин Андрей Иванович – к.б.н., ас. каф. ботаники и физиологии растений и биотехнологий и м.н.с. Биотехнологического центра НИЧ Таврического национального университета им. В.И. Вернадского, научный консультант ООО КрымБио