Вы здесь

Постоянные микроскопические препараты. Часть 1. Фиксация и проводка

Средняя: 3.1 (7 оценок)
Фиксация и проводка фиксированного биоматериала

Суть работы по приготовлению постоянных микроскопических прператов (ПМП) следующая. Для проводки в стеклянные не большие бюксы отбираются по 10-15 шт. материала (предварительно измеренные и сфотографированные), добавляется бумажка с номером фиксации (простым карандашом, сточкой в конце цифры). Проводка проходит в этих бюксах (идет постепенная смена раствора). Последняя смесь (хлороформ 2) и материал переливаются в алюминиевые (стеклянные) бюксы, и туда добавляется стружка парафина и номерок фиксации. Сверху делается «парафиновая пробка» – расплавленный, но остывающий парафин заливается сверху, для предотвращения испарения. Это все оставляется на столе на ночь, на следующий день эти бюксы отправляются в термостат по схеме. Затем идет закапывание блоков парафином. Надо следить, чтобы не пересекались две проводки в термостате. Так как хлороформ из одной проводки может лететь в другую. Термостат нужно на время открывать для проветривания.

Проводка через спирты после FAA:

После 2-3 дней в фиксаторе тщательно промыть 70º спиртом (2-3 часа). В 70º спирте материал можно хранить долго.

Схема проводки через спирты (после FAA):

Понедельник Вторник Среда
100080º спирт 1000→IIсмесь

Поставить в термостат (40ºС). Через 1-2 часа на 60ºС. Оставить на несколько дней до удаления запаха хлороформа и на вкус (сладость) (до 10 дней).

110090º спирт 1130→IIIсмесь
1200→96º спирт (96 I) 1300→I хлороформ
1400→100º Iспирт (96 II) 1430→II хлороформ
1500→100º II спирт (96 III) 1600→в холодный парафин с хлороформом
1600→I смесь на ночь (или на 1,5 часа) -

Обработка смесями I, II, III одинакова для материалов, фиксированных и в спиртовых и в водных фиксаторах.– УНИВЕРСАЛЬНАЯ ОБРАБОТКА.

Смесь I: 3 части абсолютного спирта (можно 96º) + 1 часть хлороформа – 1,5 часа выдерживается.

Смесь II: 2 части абсолютного спирта (можно 96º) + 1 часть хлороформа – 1,5 часа выдерживается.

Смесь III: 1 часть абсолютного спирта (можно 96º) + 1 часть хлороформа – 1,5 часа выдерживается.

Хлороформ I 2 часа

Хлороформ II 2 часа (можно на ночь)

Индексы I, II, ІІІ означают, что каждый раз используется новый чистый раствор.

При работе с хлороформом нельзя пить молоко! Надо есть много яблок, и пить соки (клетчатка)!

Материал может содержать пузырьки воздуха (особенно цельные зерновки), для этого его можно слегка проколоть тонкой иглой. Если материал не опускается в смесях на дно не страшно, но его надо проверить на предмет пузырьков воздуха. Так как при проводке идет постепенная смена воды в клетках материала через спирты и хлороформ на парафин, надо следить, чтобы не было смешений и попадания предыдущих растворов в последующие. Для этого надо следить за воронкой и марлей, с которой идет работа. Под вытяжкой марля успевает высыхать, поэтому пользоваться можно одним кусочком. На бюкс, содержащий материал в 70 % спирте, накидывается марля в два слоя, все опрокидывается в воронку, которая находится на бутылке со сливом 70 % спирта. Таким образом, материал остается на марле, его вытрушивают в пустой бюкс, остатки на марле можно смыть раствором, которым будет заливаться материал. Так сменяют все растворы. Через время используемые растворы надо обновлять. При этом можно уменьшать их номер (например, спирт был №2, а станет №1), так как со временем падает концентрация растворов, а растет количество извлеченной воды из материала.

Автор статьи и фото в статье: Ляпустина Е.В.

Добавить комментарий