Постоянные микроскопические препараты. Часть 3. Нарезание на микротоме

Опубликовано: 22 января 2019 | Статьи по биотехнологии

Нарезание на микротоме

Толщина нарезания устанавливается винтом на микротоме, в зависимости от материала. Ленты укладываются в коробки на черную подкладку (бумагу) по мере нарезания с соблюдением очередности нарезанных кусков и направленности.

В эту коробку кладется номер нарезаемого блока – это означает начало выложенного материала. ОСТОРОЖНО: НЕ БЕГАТЬ И НЕ ДЫШАТЬ!!! Во время нарезания желательно направить настольную лампу на нарезаемый объект, так как парафин будет подплавливаться и не будет ломаться и крошиться. Нож хорошо бы время от времени протирать марлей, убирая кусочки парафина от старых срезов, тогда резаться будет лучше.

Закапанный блок вначале подрезается лезвием в виде трапеции (верхняя грань меньшая), а затем устанавливается параллельно ножу одной из боковых граней трапеции. Затем блок фиксируется, нож подвигается максимально близко к закапанному материалу, но не вплотную!, во избежание срезания самого материала. Срезы переносят в коробку с использованием скальпеля, игл микробиологических, кисточки…, можно прокручивать тканевый шнек, куда будет ложиться лента, нарезанных препаратов.

Не удачи при приготовлении микротомных срезов и их устранение

Вид неудачи Причина Способ устранения
Срезы рассыпаются, неправильная лента, срезы скручиваются в трубочку
  1. Парафин слишком твёрдый для данной толщины срезов.
  2. Мало оставили парафина вокруг объекта.
  3. В комнате сухо.
  4. Неряшливо отделаны блоки.
  1. Обогреть помещение.
  2. Надо следить, чтобы вокруг объекта оставалось достаточно парафина.
  3. Поставить возле микротома чашку с водой.
Срезы ломаются, трескаются (в направлении параллельном ножу) Нож поставлен слишком круто. Исправить наклон ножа.
Срезы сдергиваются с ножа при обратном ходе, раздваиваются вдоль среза Нож микротома поставлен слишком круто. Нож микротома грязный с нижней стороны. Исправить наклон ножа микротома. Вычистить нож микротома.
Срезы получаются неодинаковой толщины, иногда пропускают микротом вовсе Нож микротома стоит слишком полого. Исправить наклон ножа микротома.
Срезы гнутся
  1. Парафин слишком мягкий.
  2. Нож тупой.
  1. Работать в более холодном помещении или взять более твердый парафин.
  2. Переставить нож более острым местом или наточить нож микротома.
Срезы раскалываются вдоль На ноже микротома зазубрины или в блоке твердые пылинки. Переставить нож микротома другим местом, а если не помогает профильтровать заново парафин.
Срезы раскалываются и крошатся
  1. Плохая пропитка.
  2. Плохо закапаны блоки.
  3. Нож микротома тупой.
  1. Обычно неустранимо.
  2. Переделать блок.
  3. Наточить нож микротома.
Лента искривляется
  1. Работающий участок ножа неоднороден в отношении остроты или фасетка с одной стороны свёрнута.
  2. Передний или задний край блока не параллельно краю ножа микротома.
  1. Перевернуть нож микротома, найдя хорошее место.
  2. Исправить блок, подрезав лезвием неровную сторону.
Объект вырывается кусками из парафина (чаще бывает с пыльцевыми зернами, которые целиком выпадают)
  1. Плохая пропитка.
  2. Материал пропитан более мягким парафином, чем тот, из которого приготовлен блок.
  3. Нож микротома недостаточно острый.
  1. Не устранимо.
  2. Пропитать другим парафином.
  3. Наточить нож микротома.

Авторы статьи: Ляпустина Е.В., Сатарова Т.Н.

Авторфото в статье: Ляпустина Е.В.

 

Метки: