Вы здесь

Постоянные микроскопические препараты. Часть 5. Окраска постоянных препаратов и наклейка покровных стекол

Голосов еще нет
Постоянные микроскопические препараты

Приведем пример тройного окрашевания постоянных микроскопических препаратов:

  1. Фиксированные, нарезанные и наклеенные постоянные микроскопические препараты берут пинцетом и разогревают в пламени горелки до обесцвечивания парафина (мазком вверх).
  2. Сразу после разогрева опускают в толуол (обмывают по одному стеклу). Идет смыв парафина и замена его толуолом – толуол 0. При работе с толуолом и ксилолом надо пить молоко, активированный уголь или зорекс – препарат адсорбент! В обязательном порядке работать под вытяжным шкафом.
  3. Обмытые стекла закладывают в ванну с чистым толуолом или ксилолом (20 минут, при необходимости, можно оставить на ночь) – толуол 1.
  4. Всю ванночку достают, обмакивают в фильтровальную бумагу и переносят в новый толуол (20 минут, при необходимости, можно оставить на ночь) – толуол 2.
  5. Каждое стекло обмывают в 96º спирте. Идет постепенная подготовка к окраске, толуол заменяется на спирт – растворитель данных красителей – 96º спирт 0.
  6. После обмывки все стекла закладывают в ванну с чистым 96º спиртом (строго на 20 минут, во избежание пересушивания препарата) – 96º спирт 1.
  7. Всю ванночку достают, обмакивают в фильтровальную бумагу и переносят в новый 96º спирт (строго на 20 минут, во избежание пересушивания препарата) – 96º спирт 2.
  8. Каждое стекло достают, обмакивают в фильтровальную бумагу и обмывают в 70º спирте. Это делается для постепенной подготовки препарата к покраске, т.к. сафранин в качестве растворителя содержит 50º спирт – обмывка 70º спиртом.
  9.  После 70º спирта, каждое стекло обмакивают в фильтровальную бумагу и переносят в раствор сафранина – на кончике скальпеля добавляется краситель в 50º спирт (96º спирт:вода дистиллированная = 1:1) окрас должен быть ярко красным, не прозрачным. Приблизительно 3 скальпеля на 250 мл спирта (размер ванночки для окраски). Краситель обязательно фильтруется от кристалликов через фильтровальную бумагу. (на 1-2 часа при температуре 60ºС) – сафранин.
  10. Промывка в водевсей ванночки (водопроводная, дистилированная).
  11. Каждое стекло в отдельности опускается в 70º спирт с лимонной кислотой для корректировки интенсивности окрашивания препарата. Для дифференцирования используется растворитель на базе которого основан краситель – дифференцирование в 70º спирте с лимонной кислотой. – не обязательно.
  12. Стекла, после дифференцирования, опускаются в ванночку с 3% уксусной кислотой (10 минут) – 3% уксусная кислота. – не обязательно.
  13. Всю ванночку достают, обмакивают в фильтровальную бумагу и переносят в раствор альцианового синего (20 минут). Краситель готовится на 3% уксусной кислоте, на кончике скальпеля добавляется краситель приблизительно на 100 мл к-ты, фильтруется от кристалликов. – альциановый синий.
  14. После окрашивания каждое стекло в отдельности опускается в 3% уксусную кислоту для дифференцирования – дифференцирования в 3% уксусной кислоте. – не обязательно.
  15. Промывка всей ванночки в дистиллированной воде.
  16. Всю ванночку достают, обмакивают в фильтровальную бумагу и переносят в раствор гематоксилина Эрлиха (на 20 – 40 минут, при необходимости, можно оставить на ночь, но не желательно). Гематоксилин Эрлиха “рабочий” готовится разбавлением “маточного” в два раза дистиллированной водой и хранится в темноте!!!, и надо беречь от попадания водопроводной воды!!!
  17. Всю ванночку достают и ставят в водопроводную воду (на 20 минут) для закрепления окраски гематоксилином.
  18.  Всю ванночку промывают дистиллированной водой.
  19. Каждое стекло в отдельности промывается в 96º спирте (для постепенного избавления от воды, при переходе к ксилолу) – 96º спирт 0.
  20. Всю ванночку достают, обмакивают в фильтровальную бумагу и переносят в чистый 96º спирт (строго 20 минут) – 96º спирт 1.
  21. Всю ванночку достают, обмакивают в фильтровальную бумагу и переносят в чистый 96º спирт (строго 20 минут) – 96º спирт 2.
  22. Всю ванночку достают, обмакивают в фильтровальную бумагу и переносят в раствор 96º спирта и ксилола (лучше орто-, чем мета-) в соотношении 1:1 (строго 20 минут) – 96º спирт : ксилол = 1:1.
  23. Всю ванночку достают, обмакивают в фильтровальную бумагу и переносят в чистый ксилол (20 минут, можно на ночь) – ксилол 1.
  24. Всю ванночку достают, обмакивают в фильтровальную бумагу и переносят в чистый ксилол (20 минут, можно на ночь) – ксилол 2.
  25. Каждое стекло в отдельности достается из ксилола, обмакивается снизу фильтровальной бумагой, капается сверху 2-3 капли раствора канадского бальзама с ксилолом. Накрывается покровными стеклами, удаляются излишки, ставится в термостат на 40ºС на 1-2 суток, для того, чтобы ксилол улетучился и бальзам склеил стекла. Для переделывания препарата, для снятия покровного стекла без затрагивания мазков – предметное стекло опускают в ксилол на некоторое время и покровные стекла отпадут сами.

Покрытие срезов коллодием (по Г.И. Роскину)

При некоторых методах обработки срезов, окраски или при гистохимических реакциях, обычно применяемые методы приклеивания срезов к предметным стеклам не достигают цели. В этих случаях депарафинированные в ксилоле (или бензоле) срезы покрывают тончайшим слоем коллодия. Для этой цели предметное стекло со срезами переносят из 90° спирта на 1-2 минуты в смесь следующего состава: раствор коллодия (officinalis) – 20 частей, эфир – 40 частей, абсолютный спирт – 40 частей. Избыток смеси сливают и, не подсушивая, срезы помещают в 70° спирт, где образуется тончайшая прозрачная пленка, предохраняющая срезы при всех дальнейших обработках. После 70° спирта препарат промывают водой и далее обрабатывают как обычно, по любому методу.

Поликар рекомендует покрывать срезы коллодием перед депарафинированием, используя для этой цели еще более разведенный раствор коллодия и затем обрабатывая срезы как обычно (ксилол, спирты и т.д.).

Наклейка покровных стекол на постоянные микроскопические препараты

  • Окрашенный препарат вынимается из ксилола, нижняя сторона промокается в фильтровальную бумагу размером 2х9.
  • На препарат в 2-ух местах наносится капли бальзама.
  • Накладываются стекла постепенно, с помощью иглы, чтобы не оставалось пузыри воздуха под стеклом (используются как целые стекла, так и куски для 100% покрытия наклеенного материала).
  • Препараты укладываются в папки и ставятся в термостат при температуре в 40ºС, где они сохнут 1-2 суток (ксилол испаряется, а Канадский бальзам склеивает предметное и покровное стекла). Препаровальной иглой проверяют высох ли бальзам – он не должен тянутся!
  • После того как препараты высохли, если есть пузыри воздуха под покровным стеклом, то можно капнуть сбоку каплю бальзама, и она сама затечет под покровное стекло (после чего, повторить выдержку в термостате).
  • Если пузырей воздуха под покровным стеклом слишком много, то предметное стекло полностью погружается в ксилол до тех пор, пока покровные стекла самостоятельно отпадут. Повторить процедуру наклейки покровных стекол.

Дальнейшая обработка материала – окантовка эмалевым лаком по Кошпинтеру

На покрытый предметным стеклом препарат кисточкой наносят эмалевый лак так, чтобы его полоски заходили на 1-2 мм на поверхность покровного стекла. Поверхность стекла должна быть чистой и сухой. Через несколько дней подсушивания полоски следует нанести вторично. Очень хорошая смесь эмалевого лака и цинковых белил. Эта смесь быстро сохнет. Для приготовления смеси берут лак и белила в необходимых количествах. Растирают спичкой. Белил берётся столько, чтобы получилась однородная, непрозрачная хорошоразмазывающая масса. Обе прописи дают хорошие результаты.

Авторы статьи: Ляпустина Е.В., Сатарова Т.Н.

Автор фото в статье: Ляпустина Е.В.

Добавить комментарий