Производство пробиотиков. Стадия 5 Получение бактериальной массы

Стадия ТП.5. Получение бактериальной массы

ТП.5.1. Выращивание микроорганизмов на производственной питательной среде

Для получения одной серии препарата, которая содержит преимущественно 15000 ампул, использующих биомассу, которую засевают на 250 матрасов с производственной питательной средой (агаризованное пивное сусло). Для того, чтобы засеять вышеуказанное количество матрасов необходимо на стадии ТП.4.2. приготовить 6-7 бутылок «маточной» взвеси, так как 450 мл микробной взвесь из одной бутылки используется для посева 45-50 матрасов. Перед выполнением всех этих операций на этой стадии матрасы с производственной средой проверяют на Прорист посторонней микрофлоры и при наличии роста посторонней микрофлоры их отбраковывают с последующим обеззараживанием в камере Крупин (ГФ-8). (Мк 5.1.1.). Посев «маточной» взвеси на матрасы делается врозь, при этом следует соблюдать соотношение Bacillus subtilis 3 и Bacillus licheniformis 31 соответственно 9:1. В каждый матрас (С-21) в стерильных условиях вносят 7-10 мл посевного материала, который равномерно распределяется по всей поверхности питательной среды. Матрасы помещают в термическую камеру. Bacillus subtilis 3 инкубируют 10-12 суток при +37. Bacillus licheniformis 31 — 8-10 суток при +37. По окончании срока инкубации матрасы с посевами просматривают в Прорист посторонней микрофлоры: визуально, микроскопией, посевом на чашки Петри с МПА. Из бактериальной массы делают мазки по Граму и микроскопируют их. Слив из матрасов делают только в том случае, если в мазках оказывается не менее 60-80% микроорганизмов в споровой форме (Мк 5.1.2).

ТП.5.2 Соскоб биомассы из питательного агара

В каждый матрас стерильно вносят 20-25 мл 0,85% NaCl проверен на стерильность. Шпателями делают соскоб микробной пленки с агаризованной среды в матрасах. После соскоба пленку сливают в 20 л баллон (С-23) пропустил через фильтр (2 слоя стерильного капрона и 4 слоев стерильной марли), установленный на воронке с мелкой сеткой из нержавеющей стали. Содержание баллона перемешивают и определяют количество микробов в 1 мл взвесь. Она должна быть не менее 120 млрд. клеток (Мк 5.2.1).