Производство вакцины от пастереллеза. Стадия 2 Приготовление питательной среды

Изготовление питательной среды для производства вакцины от пастереллеза

Изготовление питательной среды (ТП-2) состоит из следующих операций:

ТП-1. Изготовление ОПХ – основной перевар Хоттингера

В реактор Р-1 на 250 л загружаем 44,52 кг говяжьего или конского сырого мясного фарша, полученного от животных средней упитанности, добавляем 66,78 литра дистиллированной или водопроводной обессоленной питьевой воды с температурой 40-42°С и 0,31 г натрия двууглекислого из расчета, чтобы концентрация водородных ионов (рН) была 7,2-7,4. После этого на каждый килограмм фарша добавляем 7,79 кг панкреатина и на каждый литр смеси 1,67 л хлороформа медицинского. Все тщательно перемешивается. Все указанные компоненты закладывают в реактор, плотно закрывают люк и тщательно перемешивают. Смесь должна заполнить реактор не более 75-85% объема. Внутри реактора поддерживают температуру 40-42°С автоматической аппаратурой для автоматического регулирования температуры и включения мешалки. Смесь в реакторе при указанной температуре перемешивают по 2-3 минуты каждые 2 часа — в течение 5-6 суток. В процессе гидролиза ежедневно определяют рН смеси. При снижении рН перевар подщелачивают до рН 7,2-7,4 добавляя 10%-й раствор натрия гидроксида. Полное ферментативное расщепление фарша проходит за 5-6 суток. К этому времени стабилизируется рН до 6,8-6,9. Падение содержания триптофана свидетельствует о готовности перевара. По окончании срока и без отклонений от технологического процесса, мясной фарш превращается в смесь с сероватым рыхлым осадком и надосадочной жидкости светло соломенного цвета, рН стабилизируется.

ТП-2. Изготовление ТПК — триптический перевар казеина

Для изготовления триптического перевара используют казеин кислотный высшего или первого сорта. В реактор Р-2 загружаем 4,45 кг казеина, добавляем 35,62 л подогретой до 40-42°С дистиллированной обессоленной водопроводной питьевой воды, 0,13 г натрия двууглекислого из расчета концентрации водородных ионов 7,2-7,4; 2,67 кг панкреатина, 0,6 л хлороформа медицинского. Реактор заполняют не более 75-85% объема, плотно закрывают и тщательно перемешивают 1,5-2 минуты. Внутри реактора температуру поддерживают на уровне 40-42°С в течение всего процесса переваривания. Для обеспечения необходимого режима переваривания реактор оборудуют аппаратурой автоматического регулирования температуры и перемешивания. Перемешивают по 2-3 минуты через каждые 2 часа в течение 6-7 суток, до полного ферментативного расщепления. Казеин превращается в гомогенный осадок, над которым надосадочный слой жидкости имеет цвет от светло-желтого до светло-коричневого, рН 6,8-6,9. Готовый триптический перевар казеина перекачивают в стеклянные 16-20 литров бутыли, добавляют соляную кислоту до рН 3,8-4,0. Перевар казеина в бутылях хранят до использования. Надосадочная жидкость используется как основа питательной среды. Перед использованием его фильтруют через нутч-фильтр и получают 43,47 кг готового ТПК – триптического перевара казеина.

ТП-3. Изготовление бульона

Для изготовления питательной среды для вакцины используют 121,08 кг основного перевара Хоттингера в смеси с осадком и 30,43 кг надосадочной жидкости триптического перевара казеина, разбавляют подогретой до 50-60°С дистиллированной или обессоленной водопроводной питьевой водой из расчета конечного содержания аминного азота в питательной среде 185-200 мг%. При этом руководствуются следующими расчетами: 25-35 мг% аминного азота поступит за счет пептона, остальные 160-175 мг% — за счет ОПХ и ТПК. В реактор Р-3 на 1000 л закладывают 151,51 кг смеси ОПХ и ТПК, доливают водой в количестве 606,03 кг и добавляют 3,79 кг пептона и 1,07 кг соляной кислоты. Смесь подогревают до 60°С, кипятят 30 минут и фильтруют через нутч-фильтр. Получают фильтрат в количестве 533,68 кг сливают в чистый варочный котел Р-4.

ТП-4. Изготовление питательной среды для вакцины от пастереллеза

В реактор Р-4 добавляют воду до первоначального объема, добавляют 0,8 кг агара, предварительно растопленного в автоклаве. После подогрева, при перемешивании, добавляют 1,60 кг натрия хлорида, 2,68 кг натрия фосфорнокислого двузамещенного. Смесь снова доводят до кипения и добавляют 5,39 кг желатина, предварительно промытого спиртом добавляют также сахарозу в количестве 1,09 кг, подщелачивают 10%-м раствором гидроокиси натрия до рН 8,0-8,2. Смесь кипятят 60 минут, затем питательную среду отстаивается в варочном котле до полного просветления 1,5-2 часа, фильтруют через нутч-фильтр и перегоняют в отдел для изготовления вакцины. В реакторы Р-5 и Р-6 загружают аналогичное количество компонентов и проводят те же операции, что и с вышеназванными реакторами.