Чистый посевной материал, с соблюдением условий стерильности, через посевную трубку засевают в реактор с питательной средой из расчета 4-5% от объема среды в реакторе. Питательная среда при посеве должно иметь стабильную температуру t = 35-36°С не менее чем в течение 2-3 часов. Перед посевом избыточное давление в реакторе снимают. Засеянную питательную среду в реакторе перемешивают механической мешалкой 2-3 минуты. В дальнейшем, в течение выращивания, культуру перемешивают через каждые 2 часа по 1,5-2 минуты. Культуру рожи свиней выращивают в течение 20-24 часов. После окончания выращивания, перед обработкой культуры, берут пробы для микроскопии мазков, высевают на МПА и МПБ для проверки чистоты. При микроскопии в мазках должны быть микробы вакцинного штамма, типичной морфологии, без наличия посторонней микрофлоры. Одновременно берут пробу культуры для определения концентрации микробных клеток методом фотоэлектрокалориметрии и методом последовательных разведений с высевом на пластиночный агар в чашки Петри.
Концентрацию микробных клеток (количество живых микробных клеток в 1см3 культуры) определяют следующим методом: в 7 пробирок вносят по 4,5 см3 МПБ. Мерной пипеткой (на 1см3) вносят 0,5 см3 культуры, после чего пипетку 3-4 раза промывают, набирая и выпуская культуру в эту же пробирку. Таким же образом из первой пробирки 0,5 см3 культуры переносят в другую пробирку, со второй в третью и т.д. до семи. Получим разведения 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6, 10-7. На каждое последующее разведение следует брать отдельную пипетку. Из двух последних разведений, с каждой отдельно, высевают микропипеткой по 0,1 см3 на 2 чашки Петри с агаром Хоттингера, равномерно распределяя по поверхности агара. Засеянные чашки ставят в термостат с температурой 36-37°С на 48-72 часа, после чего подсчитывают количество колоний, выросших в чашках каждого разведения. Потому что на 2 чашки засевают 0,2 см3 разбавленной культуры, то сумма колоний делят на 2 и увеличивают в 10 раз, получают количество микробных клеток в 1см3 данного разведения. После этого добавляют столько нулей, какой показатель степени совершенного разведения, получают концентрацию микробных клеток исследуемой культуры (по одному разведению). Затем выводят среднюю концентрацию микробных клеток в 1см3 культуры, составив результаты обоих взятых разведений и разделив на 2. Концентрация микробных клеток в конце выращивания культуры должна быть 300-500 миллионов в 1см3 (± 10-15%).
После взятия пробы микроскопии культуры, давление в реакторе сравнивают с атмосферным и соблюдая стерильные условия, добавляют в реактор с выращенной культурой 4%-й гидрат окиси алюминия в количестве 40% от объема культуры в реакторе.
Изготовленную вакцину смешивают механической мешалкой в течение 2-3 минут, после чего высевают во флаконы с МПБ, в пробирки на скошенный МПА, МПБ под вазелиновым маслом, также микроскопируют мазки. Посев ставят в термостат t = 36-37°С на 24-48 часов. Готовая вакцина должна иметь рН = 7,4-7,6.
Вакцину от рожи свиней охлаждают пропусканием холодной воды за внешнюю оболочку реактора. Во время охлаждения в реакторе поддерживают давление 0,5-0,6 атм., путем добавления в реактор, по мере необходимости, стерильный сжатый воздух.
Автор фото в статье: Ляпустина Е.В.