При культивировании изолированных зиготических зародышей, проростки и растения можно получить из трехнедельных зародышей. К этому времени зародыши находятся на стадии свободной глобулы — сердца, и их можно выделить, но это довольно трудоемкая и непроизводительная операция.
Таким образом, на среде МСм с 0,1 мг/л кинетина, вполне возможно получать растения из трехнедельных зародышей. Более технологично и сравнительно легко выделяются четырехнедельные зародыши, которые к этому времени полностью дифференцированы и находятся на семядольной стадии развития. Размеры зародышей — 0,44-0,46 мм, что составляет примерно треть от длины зрелого зародыша, анализ прорастания зародышей показал, что количество образующихся проростков увеличивается с возрастом зародышей. Количество образующихся проростков из разновозрастных зародышей также определяется составом питательной среды.
Оценивая возможности культуры изолированных завязей и зародышей, можно отметить, что проростки из зародышей можно получить в более ранние сроки выделения по сравнению с завязями. Всхожесть выделенных зародышей гораздо выше, чем у завязей. Формирование растений из зародышей происходит значительно быстрее, чем из одновозрастных завязей. Так, из четырехнедельных зародышей хорошо развитые растения формируются через 6 недель, в то время как из завязей – через 10 недель. Однако изолированные зародыши более требовательны к составу среды.
При оценке действия сред различного состава на рост и развитие растений из изолированных разновозрастных зародышей было установлено, что растения лучше всего развиваются на полной среде МСм с 0,1 мг/л кинетина. Однако растения могут формироваться и на средах, содержащих основные соли и сахарозу.
Растения из зародышей отличались большей высотой и большим количеством листьев. Растения из завязей за тот же период культивирования были менее развиты. Но проростки из завязей могли образовываться и на сахарозном агаре, а не только на полноценно разработанных питательных средах, как изолированные зародыши. Лучшее развитие растений из зародышей, по сравнению с растениями из завязей, отмечается и при более поздних сроках отделения недоразвитых семян от материнского растения.
В результате исследований было установлено, что растения моркови можно получать из семяпочек, находящихся на ранних стадиях развития. Образование проростков из одно- и двухнедельных семяпочек наблюдалось через недель, трехнедельных семяпочек – через 3-4 недели, четырехнедельных семяпочек – через 2-3 недели культивирования на питательной среде in vitro. У семяпочек более поздних сроков период их прорастания сокращался, составляя у восьминедельных семяпочек одну неделю, т. е. соответствовал периоду прорастания зрелых семян.
Сравнивая рост и развитие растений из одновозрастных зиготических зародышей и семяпочек, отмечается, что на формирование листьев существенное влияние оказывает генотип исходного растения и тип экспланта.
В отношении эксплантов – большее количество листьев формировалось у растений из семяпочек. На высоту растений, наряду с генотипом исходного растения и типом экспланта, значительное влияние оказывал также и возраст эксплантов. В целом наиболее высокими были растения из эксплантов пятинедельного возраста, а наименьшая высота была отмечена у растений четырехнедельного возраста. Среди эксплантов наибольшая высота была отмечена у растений из семяпочек. Аналогичный характер различий по количеству листьев и высоте растений сохранялся и при анализе растений через 6 недель культивирования.
Исследования показали, что в культуре in vitro можно получать растения из семяпочек на очень ранних стадиях их развития. При культивирований изолированных семяпочек на питательной среде образуются растения большей высоты и с большим количеством листьев по сравнению с растениями из одновозрастных зародышей. При культивировании на питательных средах in vitro оплодотворенных генеративных органов моркови, растения можно получать из разновозрастных завязей, семяпочек и зиготических зародышей.
Источник: Основы биотехнологии моркови