Вы здесь

Методические рекомендации Селекция продуцентов

Методические рекомендации Селекция продуцентов
Средняя: 5 (2 оценок)
Город: 
Год издания: 
2000
Страниц: 
6стр.
Формат: 
doc
Размер: 
0.50Mb

В представленных методических рекомендациях «Селекция продуцентов» приводятся методы, с использованием которых определяют токсическое действие структурного аналога триптофана по отношению к ростовым показателям  бактерий Pseudomonas mendocina. 

В данном источнике широко используются его структурные аналоги: 5-метилтриптофан, 4-, 5- и 6-фтортриптофан, ацетилтриптофан, фториндол, D-триптофан и другие.

Структурные аналоги действуют как корепрессоры синтеза конечного продукта или аллостерические ингибиторы ферментов соответствующего пути, однако функционально заменить нормальный метаболит не могут. Снять токсическое действие аналога можно лишь в присутствии избытка соответствующего нормального продукта, поэтому при высеве бактерий на минимальную среду с аналогом будут расти лишь клоны, продуцирующие данную аминокислоту конститутивно вследствие нарушений регуляции синтеза или снятия ретроингибирования. Уровень продукции у таких мутантов может превышать уровень нормального синтеза. Мутации устойчивости бактерий к токсическим аналогам затрагивают, как правило, регуляторную область (для триптофанового оперона – это мутации в trpR-гене или операторной области).

Получение продуцентов, как правило, осуществляется в несколько этапов селекции, при этом используются различные аналоги, постепенно повышая уровень продукции интересующего метаболита. При этом отбор аналогрезистентных мутантов может быть совмещен с отбором ауксотрофных мутаций и мутаций, вызывающих чувствительность клеток к прочим метаболитам. Конечным результатом такого отбора должен стать высокий уровень синтеза естественного метаболита, позволяющий ему конкурировать со структурными аналогами за участие в метаболизме клетки.

В методических рекомендациях «Селекция продуцентов» также описано получение регуляторных мутантов Pseudomonas mendocina, устойчивых к токсическим аналогам триптофана. С использованием НГ-мутагенеза у бактерий Pseudomonas mendocina ВКМВ1299 получают мутанты с нарушенной регуляцией синтеза триптофана.