Определение количества живых бифидобактерий (Bifidobacterium bifidum) в 1 дозе
Определение количества живых бифидобактерий в 1 дозе проводят на трех образцах препарата от каждой серии. Количество живых бифидобактерий в одной дозе проверяют параллельно с рабочим стандартным образцом (РСО) бифидумбактерина.
РСО бифидумбактерина представляет собой высушенную взвесь живых бифидобактерий Bifidobacterium bifidum № 1 по 5 доз во флаконах и содержит 107 живых микробных клеток в одной дозе. Хранить при температуре минус (8±2)°С.
Содержание флаконов бифидумбактерина и РСО разводят водой из расчета 1 мл на 1 дозу и оставляют на 1 час при комнатной температуре для регидратации биомассы. Полученные микробные суспензии препарата и РСС по 1 мл переносят в пробирки, содержащие по 9 мл модифицированного печеночного среды Блаурока или бифидум-среды Блаурока и перемешивают путем 12-15 кратного прокачки, получая при этом 1 дозу бифидобактерий в объеме 10 мл среды (разведение 10-1). Из этих пробирок делают последовательные десятикратные разведения до 10-9. Пробирки с разведенными исследуемых образцов препарата и РСС в питательных средах помещают в термостат при температуре (38±1)°С и инкубируют в течение 4-х суток.
После окончания инкубации отмечают разведения, в которых рост колоний бифидобактерий в виде «гвоздей», «крошек», «нитей».
Количество живых бифидобактерий (Bifidobacterium bifidum) N в одной дозе определяют по формуле:
N=n*x*10*m-1
где n — количество колоний в данной пробирке, m — величина разведения микробной суспензии.
В первую очередь учитывают результат в ряду растрирования РСО. Если рост бифидобактерий наблюдается в разведении не менее 10-8, это свидетельствует об удовлетворительных ростовые свойства питательной среды и достоверность результатов анализа. Если в ряду разведений РСС рост наблюдается в разведении меньше, чем 10-8, то опыт необходимо повторить на другой серии питательной среды.
Препарат считают пригодным, если рост бифидобактерий в ряде десятикратных разведений исследуемого препарата отмечается не менее, чем в пробирке с разведением 10-8, что соответствует содержанию 107 КОЕ живых микробных клеток в одной дозе. Если содержание живых микробных клеток в одной дозе исследуемого препарата меньше, чем 107 КОЕ, а в 1 мл РСО — 107 КОЕ, тогда контроль необходимо повторить на удвоенном количестве образцов.
Если при повторном контроле показатели РСО отвечают предъявленным требованиям, а показатели исследуемого препарата ниже, то серию препарата бракуют.
Определение активности кислотообразования препарата пробиотика Бифидумбактерин
Проводят титрометрический метод при выращивании бифидобактерий, содержащийся во флаконе в модифицированном печеночном среде Блаурока или бифидум-среда.
В каждом опыте учитывают показатели из двух образцов препарата. К биомассы, лиофилизированной во флаконе, добавляют печеночная среда Блаурока или бифидум — среда из расчета 1 мл на одну дозу препарата.
Из двух образцов разбавленного таким образом препарата, переносят по 2.5 мл микробной взвеси в пробирки (d = 2 см, h = 20 см) с 25 мл печеночного среды и выдерживают в течение (72±1) ч при температуре (38±1)°С . После этого проводят определение кислотности в каждой пробирке.
10 мл полученной суспензии вносят в химический стакан емкостью 50 мл и титруют 0,1 М раствором гидроксида натрия Р до рН 8,5±0,1. Показатель рН контролируется потенциометрические.
Кислотность в градусах Тернера определяют по формуле:
°T = V * K * l0,
где V — объем 0.1 М раствора гидроксида натрия Р9 использованного на титрование, в миллилитрах; К — коэффициент поправки к титру 0.1 М раствора гидроксида натрия Р.
Средняя величина активности кислотообразования, полученная для двух образцов должна быть не ниже 90°Т. В случае получения в одном из образцов показателей кислотности ниже 90°Т опыт повторяют. Если при повторном определении результат неудовлетворительный-препарат бракуют.
Автор статьи: Просяник Алина, студентка кафедры биотехнологии и микробиологии Национального университета пищевых технологий