Вы здесь

Производство пробиотика Бифидумбактерин (1). Получение маточной культуры

Средняя: 5 (2 оценок)
Получение маточной культуры

Получение нативной микробной взвеси

Получение культуры и генерации

Технологический процесс проводить в помещении VI "Помещение получения производственных культур" класса чистоты В и в помещении VII "Термостатная комната" класса чистоты В.

Биологическим агентом для получения бифидумбактерина является штамм Bifidobacterium bifidum № 1.

Для получения культуры и генерации 20 флаконов с лиофилизированным штаммом Bifidobacterium bifidum № 1, рабочей посевной серии, с КОЕ / доза = 10 обрабатывают 76% спиртом, вскрывают и градуированной пипеткой в асептических условиях вносят 5 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия. Содержание флаконов перемешивают и той же пипеткой переносят в стерильный баллон, в котором находится 0,8 л стерильного бифидум среды.

Содержание баллонов тщательно перемешивают, закрывают ватно-марлевой пробкой и помещают в термостатные комнату, где автоматически поддерживается оптимальная для роста бифидобактерий температура (38±1)°С. Посев выдерживают при указанной температуре в течение 70-72 часов.

Для контроля чистоты производственного штамма остатки посевного материала пастеровской пипетки засевают в пробирки с питательным агаром и МПА с 5% глюкозы и выдерживают в термостате при температуре (37±1)°С в течение 24 часов.

Чистую микробную культуру и генерации в баллонах в объеме 1,6 л передают на операцию Получение культуры II поколения.

Получение культуры II поколения

Культуру и генерации из баллона пересевают в стерильные баллоны, в которых содержится по 17,7 л стерильного бифидум среды, тщательно перемешивают, закрывают ватно-марлевой пробкой и инкубируют в термостатный комнате при температуре (38±1)°С в течение 46-48 часов при тщательном перемешивании городу емкости 3 раза в день.

Остатки культуры и генерации из емкости контролируют отсутствие посторонней микрофлоры методом посева по 0,005 мл или 0,01 мл на одну чашку Петри с МПА и на одну чашку Петри со средой Сабуро. Посевы на МПА инкубируют в термостате при температуре (38±1)ºС на протяжении 48 часов. Посевы на среде Сабуро инкубируют при температуре (22±1)°С в течение 72 часов. После окончания инкубации на чашках Петри должен отсутствовать рост посторонних микроорганизмов.

Чистую культуру II генерации в баллонах в объеме 15,51 л передают на операцию Получение нативной микробной массы (III поколение).

Получение нативной микробной взвеси (III генерация)

Выращивание бифидобактерий проводят в биореакторе емкостью 250 л. Перед началом работы его стерилизуют паром. Режим стерилизации: температура 138±1°С - 20 минут или температура 121-125°С - 45 минут.

В простерилизованные, охлажденный биореактор через специальный сифон вакуумом загружают стерильное бифидум среду. Объем загруженного питательной среды - 90 л.

Питательная среда повторно стерилизуют в биореакторе при температуре 110°С в течение 30 минут, путем подачи пара в рубашку аппарата. После охлаждения простерилизованного среды до температуры культивирования (38±1)°С в асептических условиях отбирают стерильную пробу для контроля стерильности питательной среды.

Засев питательной среды осуществляется при температуре (38±1)°С.

Процесс культивирования бифидобактерий в биореакторе длится 6-8 часов под аргоновой подушкой. Пробы культуральной жидкости из аппарата отбирают через каждые 2 часа для определения оптической плотности, специфической активности, проверки значений рН и для контроля чистоты культуральной жидкости. После засева питательной среды в процессе выращивания необходимо:

  • Следить за температурой культивирования (38±1)°С;
  • Давление в аппарате поддерживать в пределах 0,03 -0,04 МПа;
  • Мешалку в аппарате включать на несколько минут (2-3 минуты) только перед отбором проб и после подачи 5% раствора аммиака, частота перемешивания 70-100 о6/хв;
  • РН в аппарате поддерживать в пределах 6,3-6,5, корректируя 5% раствором аммиака.

Замер рН и температуры в аппарате производится автоматически. По окончании процесса культивирования показатель рН устанавливают в пределах 6,3-6,5, после чего микробную суспензию охлаждают подачей холодной водопроводной воды в рубашку аппарата.

Остатки культуры II генерации из емкости контролируют отсутствие посторонней микрофлоры методом посева по 0, 05 мл или 0,01 мл на одну чашку Петри с МПА и на одну чашку Петри со средой Сабуро. Посевы на МПА инкубируют в термостате при температуре 38±1°С в течение 48 часов. Посевы на среде Сабуро инкубируют при температуре (22±1)°С в течение 72 часов. После окончания инкубации на чашках Петри должен отсутствовать рост посторонних микроорганизмов.

Контролируют специфическую активность остатков культуры II генерации из емкости путем посева в 9 пробирок, содержащих по 9 мл бифидум среды. 1 мл остатков культуры II генерации вносят в первую пробирку с 9 мл бифидум среды-это первое разведение 10-1. Полученное разведение тщательно перемешивают путем 12-15-кратного покачивания пробирки. С этой пробирки делают последовательные десятикратные разведения до 10-9. Посевы термостате при температуре (38±1)°С в течение 96 часов. После окончания инкубации в разведении 10-6 должен наблюдаться рост колоний бифидобактерий в виде «гвоздей», «крох» и «нитей».

По окончании процесса культивирования микробную взвесь с биореактора сливают в стерильные баллоны емкостью 16 л.

Для получения одной серии готовой продукции формируется по загрузке в лиофильной сушки ТГ-50, 12,5 л микробной суспензии передают на стадию Получение производственной культуры. Микробную взвесь, которая осталась, хранят в холодильной камере при температуре (3-4)°С до следующей операции сушки.

Ферментер после слива микробной взвеси заполняют очищенной водой, которую нагревают до 100°С и выдерживают в течение 30 минут, после чего с помощью сжатого воздуха сливают в канализацию промышленных стоков. Пропарка пустой ферментера проводят в течение 15 минут.

Читайте также:

Автор статьи: Просяник Алина, студентка кафедры биотехнологии и микробиологии Национального университета пищевых технологий

Добавить комментарий